做过细胞实验的人都知道，细胞凋亡的过程中, 染色体DNA双链断裂或单链断裂而产生大量的粘性3'-OH末端，而这些，可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT）的作用下，将脱氧核糖核苷酸和荧光素、过氧化物酶、碱性磷酸酶或生物素形成的衍生物标记到DNA的3'-末端，而正常的或正在增殖的细胞，因为几乎没有DNA的断裂，所以也就没有3'-OH形成，所以细胞也就很少能够被染色。这种检测细胞凋亡的方法就是TUNEL法！

那TUNEL法检测细胞凋亡，有什么问题需要格外注意的吗？今天，就让我们告诉你！

TUNEL法检测细胞凋亡要点1：脱蜡和水化一定要充分

脱蜡可以先 60oC处理20分钟，再用使用二甲苯处理2次；而水化则用梯度法，乙醇从高浓度到低浓度浸洗。

TUNEL法检测细胞凋亡要点2：把握好细胞通透的时间

蛋白酶k反应时间一般为10-30 min，具体时间长短与切片厚薄有关，这个可以多测试几遍找出最佳时间，要知道，过长易脱片，过短起不到通透效果，所以没办法，多测看看什么时候既不脱片，又能够使后面的酶和抗体进入胞内就可以了。

TUNEL法检测细胞凋亡要点3：适当延长 TUNEL 反应液的时间

一般是37oC处理1小时，具体根据凋亡损伤程度具体选择。

TUNEL法检测细胞凋亡要点4：DAB 显色条件的选择要多测

DAB 显色反应大约需要10 min，要控制好反应时间，勿使背景颜色过深，多测多摸索。

TUNEL法检测细胞凋亡要点5：PBS 的充分清洗

在 TUNEL 反应后和酶标反应后的清洗要充分，清洗次数可适当增加，不然容易影响到后面切片的非特异性着色。

TUNEL法检测细胞凋亡要点6：富含内源性过氧化物酶的组织，适当增加过氧化氢浓度和延长封闭时间

对于肝脏、肾脏等血细胞含量多的组织，因富含内源性过氧化物酶，可以适当延长封闭时间和升高过氧化氢的浓度，可以达到很好的封闭效果，且不影响最终的特异性染色。

文章出自 细胞实验外包   想了解更多请关注：http://www.dj-cro.com/